2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定

2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定細胞介紹

這株細胞是2001年從(cong) 人胚腎細胞株293衍化而來。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨後,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染。pEKORF6從(cong) 包含潮黴素抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來。載體(ti) 包含SV40病毒序列。

2V6.11細胞株初從(cong) 含潮黴素的培養(yang) 液中用克隆環分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

細胞特性
1） 來源：人胚胎腎髒
2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個(ge) /mL
4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式

（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；

（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

（3）收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定接收後的處理：
1） 收到細胞後，請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3） 觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中（或新的培養(yang) 瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基）。
6）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後di一次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代 。

                     
細胞培養(yang) 步驟
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗 1%
2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
3） 凍存液：90%FBS，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量*培養(yang) 基終止消化。
3. 輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心5分鍾，棄去上清液，加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下麵T25瓶為(wei) 類；

1，細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml*培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

18新利苹果客户端密码主要產(chan) 品和技術服務：

一、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
      原代細胞分離和培養(yang) 相關(guan) 試劑、kit、培養(yang) 基添加劑等；
      原代細胞相關(guan) 技術服務和整體(ti) 實驗外包服務；

二、細胞株/係服務
      細胞株/係培養(yang) 、增殖、凍存和相關(guan) 說明書(shu) ；
      細胞係培養(yang) 過程的技術指導；
      細胞係培養(yang) 基、添加劑、血清及相關(guan) 生長因子、試劑等；

三、iPS細胞
      iPS細胞基礎培養(yang) （有滋養(yang) 層or無滋養(yang) 層在）；
      iPS細胞增殖及冷凍保存；
      iPS基礎培養(yang) 技術實習(xi) ；
      新藥及實驗儀(yi) 器上市前評估；

四、技術外包服務：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

五、其他：根據客戶需要定製服務等

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