人乳腺癌細胞MDA-MB-231的傳代步驟是怎樣的？

　　人乳腺癌細胞MDA-MB-231是一種人乳腺癌細胞係，常用於腫瘤轉移和侵襲性的研究。該細胞係來源於一個四級侵襲性乳腺癌患者的異種移植物，在體內形成了高度轉移和惡性侵襲的表現。

 

　　通常在無菌環境中使用層流罩。培養基的更換與細胞的生長速度密切相關。如果在6-16小時內更換培養基，可以去除殘留的亞甲基楓樹和死細胞。可用於進一步科學研究，不能用於治療等方麵。

　　血清的類型和質量會對人乳腺癌細胞MDA-MB-231的生長產生影響。血清是細胞培養非常重要的營養來源。錯誤使用血清會使細胞無法存活。細胞無法存活的另一個原因是培養基。每個細胞係都有其特定的用途和適應的細胞培養基。如果突然使用不同培養條件的培養基，大多數細胞不能立即適應。
 

　　1、用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其平躺置於培養箱中進行1-3小時的緩衝，然後置於無菌操作台，打開瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)並置於細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

　　2、待細胞長滿瓶底麵積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:3到1:6；

　　3、人乳腺癌細胞MDA-MB-231傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置於37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入3-5mlPBS，輕晃洗滌後棄去。往瓶中加1-2ml預熱好的胰酶，置於37°孵育消化（第一次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間，記錄最佳消化時間，以便於下次消化），消化好後加入3ml培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然後收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進行傳代。
 

　　MDA-MB-231細胞具有以下特征：

　　高度轉移能力：該細胞係可以從原位腫瘤進入血液或淋巴管道，並在機體其他部位進行遠處轉移；

　　低黏附性：這類腫瘤細胞容易在無血清培養條件下暴發式擴張，並不容易貼壁死亡；

　　快速增殖：MDA-MB-231生長快、分裂率高，呈纖錐型或多角形；

　　藥物耐受性強：經過多次化學治療後，部分患者可能出現藥物耐受情況。

　　缺少ERα雌激素受體表達，即是TNBC(三陰)（Triple-negative breast cancer）之一。